Plásmido Doble Nickase (h) MacroH2A: sc-407013-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)MacroH2A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa MacroH2A (h) y el plásmido de doble nickasa MacroH2A (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a H2AFY2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MacroH2A Anticuerpo (C-9): sc-377452
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) MacroH2A | sc-407013-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) MacroH2A | sc-407013-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
H2AFY2 codifica la macroH2A, una variante de la histona H2A que ayuda a establecer estados de cromatina especializados y modula la salida transcripcional en todo el genoma. La incorporación de macroH2A se asocia con la memoria epigenética, la regulación de la cromatina vinculada al cromosoma X y la represión génica estable, y converge con vías que controlan la progresión del ciclo celular, el compromiso de linaje y la transcripción sensible al estrés. Al influir en la dinámica de los nucleosomas y la accesibilidad de la cromatina, macroH2A contribuye a la regulación de procesos guiados por ADN, incluidos la reparación del ADN y el control del tiempo de replicación. Los desequilibrios en las isoformas de macroH2A y su ocupación en la cromatina se han asociado con programas de diferenciación alterados y fenotipos transcripcionales relevantes para el cáncer, lo que convierte a H2AFY2 en un objetivo de interés en investigación de epigenética y biología tumoral.
MacroH2A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus H2AFY2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de H2AFY2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de H2AFY2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con H2AFY2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.