Partículas Lentivirales de Activación (h) MACF1: sc-402923-LAC

El factor 1 de entrecruzamiento de microtúbulos y actina (MACF1) es un gran andamiaje citoesquelético de tipo espectraplaquina que coordina las interacciones entre los microtúbulos y la actina F para regular la polaridad celular, la migración y la organización intracelular. En células humanas, MACF1 sustenta procesos como el recambio de las adhesiones focales, el posicionamiento de vesículas y orgánulos y la remodelación del citoesqueleto, que están en la base de la morfogénesis epitelial y el crecimiento neurítico. También se ha relacionado con la integración de señales en la corteza celular, incluidas funciones en la dinámica de la vía Wnt/β-catenina y en el tráfico dependiente del citoesqueleto. La desregulación del control citoesquelético asociado a MACF1 se ha estudiado en contextos como fenotipos del neurodesarrollo, la integridad de barreras y el comportamiento celular invasivo, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos de la arquitectura tisular y la motilidad celular.

Las partículas de activación lentiviral MACF1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de MACF1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MACF1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción MACF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de MACF1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo MACF1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.