MACF1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418945

Descripción general

Macf1 codifica el factor 1 de entrecruzamiento de microtúbulos y actina (MACF1), un espectraplaquina grande que conecta mecánica y funcionalmente los microtúbulos con el citoesqueleto de actina para coordinar la polaridad celular, la migración y el tráfico intracelular. En células de ratón, MACF1 favorece el recambio de las adhesiones focales y la remodelación del citoesqueleto, y se ha vinculado a la señalización Wnt/β-catenina mediante la regulación de la dinámica del complejo de Axin, influyendo en salidas de señalización dependientes del citoesqueleto. Al integrar las redes de actina y microtúbulos, MACF1 contribuye al desarrollo neuronal, a la organización de los tejidos epidérmico e intestinal y a las respuestas a señales mecánicas. La desregulación de programas del citoesqueleto asociados a MACF1 se ha estudiado en contextos como fenotipos del neurodesarrollo, la integridad de barrera y comportamientos migratorios tipo metastásico relevantes para modelos de biología del cáncer.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MACF1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Macf1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Macf1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Macf1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MACF1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Macf1 para la investigación de la señalización de MACF1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Macf1 críticos para la función de MACF1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Macf1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MACF1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MACF1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Macf1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MACF1 (m) y el plásmido HDR MACF1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Macf1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Macf1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.