Plásmido CRISPR de Activación (h) MACF1: sc-402923-ACT

MACF1 (factor 1 de entrecruzamiento actina-microtúbulos) es una gran espectraplaquina del citoesqueleto que coordina las interacciones entre microtúbulos y actina para controlar la polaridad celular, el transporte intracelular y la migración dirigida. Al organizar la dinámica de los extremos positivos de los microtúbulos en la corteza celular y enlazar redes del citoesqueleto, MACF1 contribuye a procesos como el crecimiento de neuritas, la organización epitelial y la motilidad asociada a heridas. Estudios funcionales sitúan a MACF1 en vías que integran la señalización Wnt/β-catenina con la remodelación del citoesqueleto y la dinámica de adhesión, influyendo en la morfogénesis tisular y la mecanotransducción. La desregulación o la variación genética en MACF1 se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, y se ha investigado en contextos en los que una organización alterada del citoesqueleto favorece un comportamiento celular invasivo.

MACF1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MACF1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MACF1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MACF1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MACF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MACF1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MACF1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MACF1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MACF1 en células tumorales con expresión de MACF1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.