Plásmido CRISPR de Activación (h) M-cadherin: sc-401232-ACT

CDH15 codifica la M-cadherina, un receptor de adhesión célula–célula dependiente de calcio, enriquecido en células del linaje del músculo esquelético e implicado en el reconocimiento y la fusión de mioblastos, así como en el mantenimiento de la arquitectura tisular. Mediante adhesión homofílica y su acoplamiento a las cateninas, la M-cadherina favorece el ensamblaje de las uniones adherentes, la organización del citoesqueleto y la señalización dependiente del contacto, lo que influye en la diferenciación y en las respuestas regenerativas. La actividad de CDH15 se entrecruza con vías que regulan la migración celular y la dinámica de membrana durante la miogénesis, y se ha descrito una expresión alterada en contextos de degeneración/regeneración muscular y en fenotipos de adhesión de células tumorales. Estas características hacen de CDH15 una diana útil para estudiar la regulación, dependiente de la adhesión, del compromiso de linaje y de la remodelación tisular en modelos celulares humanos.

M-cadherin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDH15 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

M-cadherin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDH15 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDH15, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de M-cadherin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDH15 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de M-cadherin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía M-cadherin en células tumorales con expresión de CDH15 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.