Plasmide CRISPR d'Activation (h) M-cadherin: sc-401232-ACT

CDH15 code la M‑cadhérine, un récepteur d’adhérence cellule‑cellule dépendant du calcium, enrichi dans les cellules de la lignée musculaire squelettique et impliqué dans la reconnaissance des myoblastes, leur fusion et le maintien de l’architecture tissulaire. Par une adhérence homophile et son couplage aux caténines, la M‑cadhérine favorise l’assemblage des jonctions d’adhérence, l’organisation du cytosquelette et une signalisation dépendante du contact qui influence la différenciation et les réponses régénératives. L’activité de CDH15 s’articule avec des voies qui gouvernent la migration cellulaire et la dynamique membranaire au cours de la myogenèse, et des modifications d’expression ont été rapportées dans des contextes de dégénérescence/régénération musculaire ainsi que de phénotypes d’adhérence des cellules tumorales. Ces caractéristiques font de CDH15 une cible utile pour étudier, dans des modèles cellulaires humains, la régulation de l’engagement de lignée et du remodelage tissulaire dépendante de l’adhérence.

M-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDH15 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

M-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDH15 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDH15, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de M-cadherin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDH15 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de M-cadherin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie M-cadherin dans les cellules tumorales présentant une expression de CDH15 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.