Plásmido CRISPR de Activación (h) LZTR1: sc-404531-ACT

LZTR1 (regulador de la transcripción tipo cremallera de leucina 1) codifica una proteína adaptadora de la familia BTB-Kelch que se localiza en el aparato de Golgi y funciona dentro de complejos de ligasa E3 de ubiquitina basados en CUL3 para regular la ubiquitinación y el recambio de proteínas. Se ha implicado en el control de la salida de la vía RAS/MAPK mediante la modulación de proteínas de la familia RAS y de nodos de señalización relacionados que influyen en la proliferación, la diferenciación y la homeostasis celular. La actividad alterada de LZTR1 se ha asociado con fenotipos de neurodesarrollo y de predisposición tumoral, incluidos el síndrome de Noonan y la schwannomatosis, lo que la convierte en una diana útil para estudiar el control de la señalización mediada por ubiquitina en células humanas. Como regulador vinculado a una vía, LZTR1 permite investigaciones mecanísticas sobre la proteostasis, los centros de señalización asociados a membrana y las relaciones genotipo–fenotipo.

LZTR1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LZTR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LZTR1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LZTR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LZTR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LZTR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LZTR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LZTR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LZTR1 en células tumorales con expresión de LZTR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.