Plásmido Doble Nickase (h) LysRS: sc-404110-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)LysRS consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa LysRS (h) y el plásmido de doble nickasa LysRS (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a KARS. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: LysRS Anticuerpo (A-10): sc-271331
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) LysRS | sc-404110-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) LysRS | sc-404110-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KARS codifica la lisil‑ARNt sintetasa humana (LysRS), una aminoacil‑ARNt sintetasa de clase II que une la lisina a su ARNt cognado (ARNt^Lys), garantizando la fidelidad de la traducción y sosteniendo la homeostasis del proteoma. Más allá de su función canónica en la síntesis proteica citosólica, LysRS se ha implicado en procesos ligados a la señalización mediante una localización regulada y mediante interacciones proteína–proteína que conectan la traducción con las respuestas celulares al estrés. La alteración de la función de las aminoacil‑ARNt sintetasas puede modificar la proteostasis, la señalización integrada de estrés y programas de estado celular que se investigan con frecuencia en modelos de neurodesarrollo, neurodegeneración y biología del cáncer. La actividad o expresión desregulada de KARS también es relevante para la coordinación mitocondria–citosol de la expresión génica y la adaptación metabólica, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar mecanismos centrados en la traducción.
LysRS El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KARS en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KARS. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KARS. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KARS alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.