LYPLA3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409535

Descripción general

PLA2G15 codifica LYPLA3, una fosfolipasa/desacilasa lisosomal implicada en el recambio de fosfolípidos y en la remodelación de los lípidos de membrana mediante la hidrólisis de cadenas acilo de ácidos grasos. Al contribuir al catabolismo lisosomal de lípidos, LYPLA3 se integra en vías que regulan el tráfico endolisosomal, la degradación asociada a la autofagia y la homeostasis lipídica celular. El procesamiento lisosomal de lípidos desregulado es ampliamente relevante para las respuestas al estrés metabólico y puede influir en la señalización inflamatoria y la función de los orgánulos, lo que convierte a LYPLA3 en un nodo útil para estudiar alteraciones impulsadas por lípidos en células humanas. El análisis funcional de LYPLA3 respalda estudios mecanísticos del metabolismo lipídico y de procesos centrados en el lisosoma que con frecuencia se alteran en estados celulares asociados a enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LYPLA3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PLA2G15 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PLA2G15 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PLA2G15 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LYPLA3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PLA2G15 para la investigación de la señalización de LYPLA3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PLA2G15 críticos para la función de LYPLA3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PLA2G15 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LYPLA3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LYPLA3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PLA2G15. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LYPLA3 (h) y el plásmido HDR LYPLA3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PLA2G15 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PLA2G15 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.