Plásmido CRISPR de Activación (m) LXR alpha/NR1H3: sc-423616-ACT

Nr1h3 codifica el receptor X hepático alfa (LXRα/NR1H3), un receptor nuclear activado por ligando que forma heterodímeros con RXR para regular programas transcripcionales que controlan el eflujo de colesterol, el metabolismo de los ácidos biliares y la síntesis de ácidos grasos. En macrófagos y hepatocitos, LXRα coordina el manejo de lípidos mediante dianas como ABCA1/ABCG1 y se integra con la señalización inmunitaria innata para modular la expresión de genes inflamatorios. Estas vías vinculan la actividad de NR1H3 con la biología de las células espumosas, la acumulación de lípidos aterogénicos y la inflamación metabólica, lo que lo convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudiar la homeostasis lipídica en modelos de enfermedad cardiovascular y metabólica. En sistemas murinos, la perturbación de Nr1h3 también se aprovecha para analizar el diálogo cruzado entre la detección de esteroles, la lipogénesis hepática y la polarización de células inmunitarias.

LXR alpha/NR1H3 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Nr1h3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LXR alpha/NR1H3 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Nr1h3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Nr1h3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LXR alpha/NR1H3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Nr1h3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LXR alpha/NR1H3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LXR alpha/NR1H3 en células tumorales con expresión de Nr1h3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.