Lumican Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402001

Descripción general

LUM codifica la lumicana, un proteoglucano pequeño rico en leucina de la matriz extracelular que se une a las fibrillas de colágeno y regula su ensamblaje, su espaciado y sus propiedades biomecánicas. Mediante la modulación de la organización de la matriz y de la adhesión célula–matriz, la lumicana influye en procesos como la remodelación tisular, la reparación de heridas y la señalización estromal, que convergen con vías que controlan la migración, la proliferación y las respuestas inflamatorias. La alteración de la expresión de LUM o de su distribución extracelular se ha asociado con fibrosis, fenotipos corneales y del tejido conectivo, y la remodelación del microambiente tumoral, lo que la hace relevante para estudios de mecanismos patológicos impulsados por la matriz. La lumicana también se utiliza como marcador y como nodo funcional en investigaciones sobre estados de células estromales y la homeostasis de la matriz extracelular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Lumican (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen LUM en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del LUM junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de LUM tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Lumican.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en LUM para la investigación de la señalización de Lumican, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de LUM críticos para la función de Lumican
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de LUM para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Lumican CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Lumican CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus LUM. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Lumican (h) y el plásmido HDR Lumican (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología LUM para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana LUM definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.