LTBP-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405419-ACT

LTBP4 codifica a proteína 4 de ligação ao fator de crescimento transformador beta latente (LTBP-4), uma glicoproteína da matriz extracelular que se liga a complexos latentes de TGF-β e coordena sua sequestação, estabilização e ativação regulada no espaço pericelular. Por meio de suas interações com microfibrilas de fibrilina e estruturas associadas à elastina, a LTBP-4 favorece a formação de fibras elásticas e a organização da matriz, modulando a mecanotransdução e o remodelamento tecidual. O controle, dependente de LTBP-4, da biodisponibilidade de TGF-β conecta este gene à dinâmica de sinalização via SMAD, que influencia o comportamento de fibroblastos, o crosstalk epitélio–mesênquima e programas de reparo de feridas. Alterações na expressão ou na função de LTBP4 estão associadas a fenótipos do tecido conjuntivo e pulmonares, reforçando sua relevância em estudos de homeostase da matriz extracelular e de patologias impulsionadas por TGF-β.

LTBP-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LTBP4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LTBP-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LTBP4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LTBP4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LTBP-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LTBP4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LTBP-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LTBP-4 em células tumorais com expressão de LTBP4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.