Plásmido Doble Nickase (h) LTA4H: sc-404695-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)LTA4H consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa LTA4H (h) y el plásmido de doble nickasa LTA4H (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a LTA4H. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: LTA4H Anticuerpo (D-6): sc-390567
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) LTA4H | sc-404695-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) LTA4H | sc-404695-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La LTA4H (hidrolasa de leucotrieno A4) humana es una metaloenzima de zinc bifuncional que convierte el leucotrieno A4 en leucotrieno B4, un potente mediador lipídico que amplifica la quimiotaxis, la señalización de citocinas y la activación de la inmunidad innata. A través de la vía de biosíntesis del ácido araquidónico y de los leucotrienos, LTA4H modula el reclutamiento de células inflamatorias y contribuye al equilibrio entre respuestas pro-resolutivas y proinflamatorias. La actividad desregulada de LTA4H y la señalización de LTB4 se han implicado en enfermedades inflamatorias crónicas y en el daño tisular mediado por el sistema inmunitario, y se estudian con frecuencia en el contexto de la inflamación pulmonar, cardiovascular y metabólica. Como enzima citosólica con efectos amplios sobre el comportamiento de los leucocitos, LTA4H es un nodo útil para desentrañar redes de señalización impulsadas por eicosanoides y fenotipos ligados a la inflamación en modelos celulares humanos.
LTA4H El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LTA4H en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LTA4H. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LTA4H. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LTA4H alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.