Plasmide CRISPR/Cas9 KO LST1 (m): sc-421476

Présentation

Lst1 code le transcrit spécifique des leucocytes 1 (LST1), une petite protéine immunorégulatrice associée à la membrane, enrichie dans les lignées myéloïdes telles que les monocytes, les macrophages et la microglie. LST1 contribue à moduler l’activation, la migration et la communication cellule–cellule des cellules de l’immunité innée, avec des liens rapportés à des réseaux de signalisation associés aux ITAM, au remodelage du cytosquelette et à des programmes transcriptionnels inflammatoires. Dans les tissus murins, l’expression de Lst1 suit les états des macrophages et de la microglie et est couramment utilisée comme marqueur d’infiltration immunitaire et d’activation myéloïde. Des signatures myéloïdes associées à LST1, altérées, ont été observées dans divers contextes inflammatoires et neuro-inflammatoires ainsi que dans les microenvironnements immunitaires tumoraux, étayant des études mécanistiques sur la régulation immunitaire et des phénotypes myéloïdes pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LST1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lst1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lst1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lst1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LST1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lst1 pour l'étude de la signalisation de LST1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Lst1 essentiels à la fonction de LST1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lst1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LST1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le LST1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lst1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LST1 plasmide HDR (m) et le LST1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lst1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lst1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.