LST1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421476

Übersicht

Lst1 kodiert das leukozytenspezifische Transkript 1 (LST1), ein kleines immunregulatorisches, membranassoziiertes Protein, das in myeloiden Zelllinien wie Monozyten, Makrophagen und Mikroglia angereichert ist. LST1 trägt zur Steuerung der Aktivierung angeborener Immunzellen, ihrer Migration und der Zell‑Zell‑Kommunikation bei; beschrieben sind Verknüpfungen mit ITAM‑assoziierten Signalnetzwerken, der Umgestaltung des Zytoskeletts und inflammatorischen Transkriptionsprogrammen. In Mausgeweben korreliert die Lst1-Expression mit Zuständen von Makrophagen und Mikroglia und wird häufig als Marker für Immuninfiltration und myeloide Aktivierung verwendet. Veränderte LST1‑assoziierte myeloide Signaturen wurden in verschiedenen inflammatorischen und neuroinflammatorischen Kontexten sowie in Tumor‑Immunmikroumgebungen beobachtet und unterstützen mechanistische Studien zur Immunregulation und zu krankheitsrelevanten myeloiden Phänotypen.

Das LST1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Lst1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Lst1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Lst1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LST1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Lst1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LST1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Lst1-Exone abzielen, die für die LST1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Lst1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LST1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom LST1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Lst1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LST1 HDR-Plasmid (m) und LST1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Lst1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Lst1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.