Plásmido Doble Nickase (h) Lsh: sc-402466-NIC

HELLS codifica Lsh (helicasa específica de linfocitos), un remodelador de cromatina dependiente de ATP de la familia SNF2 que favorece el mantenimiento de la metilación del ADN y la formación de heterocromatina al facilitar el acceso de las DNMT y otros reguladores epigenéticos al ADN nucleosómico. Lsh contribuye al ensamblaje de la cromatina acoplado a la replicación, a la represión transcripcional de elementos repetitivos y a la preservación de la estabilidad del genoma mediante efectos sobre la compactación de la cromatina y procesos asociados a la reparación del ADN. La desregulación de HELLS se ha vinculado con patrones aberrantes de metilación del ADN, alteraciones del control del ciclo celular y fenotipos de inestabilidad genómica observados en trastornos del desarrollo y en estudios de remodelación epigenética asociada al cáncer. Como factor nuclear de la cromatina, Lsh se investiga con frecuencia en vías que conectan la herencia epigenética, el silenciamiento de transposones y las respuestas al estrés replicativo.

Lsh El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HELLS en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HELLS. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HELLS. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HELLS alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.