Plásmido CRISPR de Activación (h) LRWD1: sc-405341-ACT

LRWD1 (dominio que contiene repeticiones ricas en leucina y repeticiones WD 1), también conocido como ORCA, es un factor asociado a la cromatina implicado en la concesión de licencia para la replicación del ADN mediante interacciones con componentes del reconocimiento de orígenes y del complejo de prerreplicación. Contribuye al disparo adecuado de los orígenes y a la progresión de la fase S al favorecer la carga y estabilización de factores de replicación en los orígenes de replicación, vinculando el estado de la cromatina con la duplicación del genoma. LRWD1 también se ha relacionado con la organización de la heterocromatina y el mantenimiento de la estabilidad genómica, procesos que influyen en el control del ciclo celular y en las respuestas al estrés replicativo. Se han reportado alteraciones en la expresión o función de LRWD1 en contextos de desregulación proliferativa, lo que lo hace relevante para estudios sobre el tiempo de replicación, la regulación de la cromatina y la biología de enfermedades asociadas a inestabilidad genómica.

LRWD1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LRWD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LRWD1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LRWD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LRWD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LRWD1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LRWD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LRWD1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LRWD1 en células tumorales con expresión de LRWD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.