LRRC50 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407107

Descripción general

DNAAF1 (LRRC50) codifica una proteína con repeticiones ricas en leucina necesaria para el preensamblaje citoplasmático de los brazos de dineína axonemal, un paso clave en la biogénesis de cilios móviles. Favorece la maduración y el tráfico del complejo motor de dineína antes de su incorporación al axonema, regulando así el batido ciliar y la depuración mucociliar. La alteración de DNAAF1 perjudica la formación de los brazos de dineína externos e internos y compromete el flujo de fluidos impulsado por los cilios. Las variantes patogénicas se asocian con la discinesia ciliar primaria con defectos de lateralidad, lo que convierte a DNAAF1 en una diana relevante para estudiar las ciliopatías y los programas de desarrollo dependientes de los cilios.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LRRC50 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DNAAF1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DNAAF1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DNAAF1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LRRC50.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DNAAF1 para la investigación de la señalización de LRRC50, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DNAAF1 críticos para la función de LRRC50
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DNAAF1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LRRC50 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LRRC50 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DNAAF1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LRRC50 (h) y el plásmido HDR LRRC50 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DNAAF1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DNAAF1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.