Plásmido Doble Nickase (h) LRP1B: sc-404088-NIC

LRP1B codifica un gran receptor endocítico de la familia de receptores de LDL que participa en la internalización mediada por clatrina y en el tráfico de ligandos extracelulares y complejos receptor. A través de sus funciones en el recambio de membrana y el reciclaje de receptores, LRP1B puede influir en la actividad de proteasas en la superficie celular, en las interacciones con la matriz extracelular y en redes de señalización posteriores vinculadas a la adhesión y la migración celular. La alteración de la función de LRP1B se ha asociado con la disrupción de la homeostasis celular y con firmas de inestabilidad genómica observadas en múltiples tipos de tumores. Como resultado, LRP1B se estudia con frecuencia en el contexto de la biología epitelial, la genética del cáncer y los mecanismos que gobiernan la captación mediada por receptores y la modulación de la señalización.

LRP1B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LRP1B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LRP1B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LRP1B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LRP1B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.