Partículas Lentivirales de Activación (m2) LRP: sc-429657-LAC-2

El gen Mvp del ratón codifica la proteína mayor del vault (MVP, también denominada LRP), un componente estructural principal de las partículas ribonucleoproteicas tipo vault, implicadas en el transporte nucleocitoplasmático, el tráfico intracelular y la regulación de la transducción de señales. MVP participa en las respuestas celulares al estrés y modula vías como la señalización PI3K–AKT y MAPK, influyendo de manera dependiente del contexto en la proliferación, la apoptosis y las respuestas inflamatorias. La alteración de la expresión de MVP se ha asociado con fenotipos de resistencia a múltiples fármacos y con la biología tumoral, y también se estudia en relación con la regulación inmunitaria y procesos neuroinflamatorios. La edición génica de Mvp en modelos murinos permite el análisis mecanístico de la función de las partículas vault, la evaluación del crosstalk entre vías bajo condiciones de estrés o exposición a xenobióticos, y estudios de genómica funcional que vinculan MVP con fenotipos celulares relevantes para enfermedades.

Las partículas de activación lentiviral LRP (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Mvp en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral LRP (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Mvp, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de LRP. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Mvp y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.