Plásmido Doble Nickase (h) LRCH4: sc-405444-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)LRCH4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa LRCH4 (h) y el plásmido de doble nickasa LRCH4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a LRCH4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: LRCH4 Anticuerpo (A-9): sc-377441
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) LRCH4 | sc-405444-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) LRCH4 | sc-405444-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LRCH4 (repeticiones ricas en leucina y dominio de homología con calponina 4) codifica una proteína citosólica caracterizada por dominios LRR y tipo CH, que se asocian comúnmente con interacciones proteína–proteína y con la organización del citoesqueleto. Evidencias recientes vinculan a miembros de la familia LRCH con la regulación de la dinámica de actina, el tráfico de membranas y la señalización de la inmunidad innata, y se ha implicado a LRCH4 en la modulación de vías inflamatorias proximales al receptor, como las respuestas mediadas por TLR. A través de estos procesos, LRCH4 puede influir en la motilidad y la adhesión celulares, así como en programas transcripcionales sensibles al estrés en contextos inmunitarios y epiteliales. La señalización inflamatoria desregulada y la remodelación del citoesqueleto son características recurrentes en trastornos inmunomediados y en la biología del cáncer, lo que convierte a LRCH4 en un objetivo útil para estudios mecanísticos de vías de señalización.
LRCH4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LRCH4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LRCH4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LRCH4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LRCH4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.