LPAAT-α Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406544

Descripción general

AGPAT1 codifica la aciltransferasa alfa de ácido lisofosfatídico (LPAAT-α), una aciltransferasa asociada al retículo endoplásmico que convierte el ácido lisofosfatídico en ácido fosfatídico, un intermediario central en la biosíntesis de glicerofosfolípidos y triacilglicéridos. Al regular los reservorios de ácido fosfatídico, LPAAT-α influye en la biogénesis de membranas, la formación de gotículas lipídicas y la señalización lipídica downstream que afecta la dinámica de los orgánulos y las respuestas celulares al estrés. La alteración de la actividad de AGPAT1 puede modificar la composición de fosfolípidos y el flujo metabólico, vinculando esta enzima con vías relevantes para la homeostasis lipídica y el balance energético. El metabolismo desregulado de glicerolípidos en el que participa AGPAT1 se ha investigado en el contexto de fenotipos metabólicos y del neurodesarrollo, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de procesos celulares impulsados por lípidos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LPAAT-α (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen AGPAT1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del AGPAT1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de AGPAT1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LPAAT-α.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en AGPAT1 para la investigación de la señalización de LPAAT-α, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de AGPAT1 críticos para la función de LPAAT-α
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de AGPAT1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LPAAT-α CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LPAAT-α CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus AGPAT1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LPAAT-α (h) y el plásmido HDR LPAAT-α (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología AGPAT1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana AGPAT1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.