LPAAT-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406544

概要

AGPAT1は、リゾホスファチジン酸をホスファチジン酸へ変換する小胞体関連アシルトランスフェラーゼであるリゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼα（LPAAT-α）をコードしています。ホスファチジン酸はグリセロリン脂質およびトリアシルグリセロール生合成における中心的な中間体です。LPAAT-αはホスファチジン酸プールを調節することで、膜の新生、脂肪滴形成、さらにオルガネラ動態や細胞ストレス応答に影響する下流の脂質シグナル伝達に関与します。AGPAT1活性の変化はリン脂質組成や代謝フラックスを変動させ得るため、この酵素は脂質恒常性やエネルギーバランスに関連する経路と結び付けられます。AGPAT1を含むグリセロ脂質代謝の異常は、代謝および神経発達に関わる表現型との関連で検討されており、脂質駆動性の細胞プロセスを機序的に研究するうえで有用な標的となっています。

LPAAT-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAGPAT1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、AGPAT1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、AGPAT1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LPAAT-αタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LPAAT-αシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、AGPAT1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LPAAT-αの機能に不可欠なAGPAT1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、AGPAT1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LPAAT-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびLPAAT-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、AGPAT1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LPAAT-α HDRプラスミド（h）および LPAAT-α HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAGPAT1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAGPAT1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。