Plásmido Doble Nickase (h) LOXL1: sc-401965-NIC

LOXL1 codifica la lisil oxidasa tipo 1 (lysyl oxidase–like 1), una aminooxidasa dependiente de cobre que cataliza la desaminación oxidativa de residuos de lisina en la elastina y el colágeno, favoreciendo el entrecruzamiento covalente y la maduración de la matriz extracelular. A través de la regulación de la elastogénesis y la fibrilogénesis del colágeno, LOXL1 contribuye a la estabilidad mecánica de los tejidos, a la señalización célula–matriz y a procesos de remodelación vinculados con la reparación de heridas y vías asociadas a la fibrosis. La actividad o expresión alteradas de LOXL1 se han asociado con la desregulación de la matriz extracelular observada en trastornos como el síndrome de exfoliación/glaucoma por exfoliación y fenotipos de remodelación del tejido conectivo. En biología del cáncer y en investigación del estroma, LOXL1 se estudia por su papel en la organización de la matriz y su posible impacto en microambientes permisivos para la invasión.

LOXL1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LOXL1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LOXL1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LOXL1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LOXL1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.