Plásmido Doble Nickase (h) LOX: sc-400973-NIC

LOX codifica la lisil oxidasa, una aminooxidasa secretada dependiente de cobre que cataliza la desaminación oxidativa de residuos de lisina en el colágeno y la elastina, iniciando el entrecruzamiento covalente que estabiliza la arquitectura de la matriz extracelular. Mediante la regulación de la rigidez de la matriz y la fibrilogénesis del colágeno, LOX influye en la adhesión celular, la migración y las vías de mecanotransducción, incluida la señalización de integrinas/FAK y los programas de remodelación de la MEC. La alteración de la actividad de LOX se relaciona con la fibrosis y una remodelación anómala del tejido conectivo, y su desregulación se ha asociado con cambios en la dinámica del microambiente tumoral y la formación del nicho metastásico en múltiples tipos de cáncer. Como enzima modificadora de la matriz, LOX se estudia con frecuencia en contextos de reparación de heridas, biología vascular y mecánica tisular.

LOX El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LOX en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LOX. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LOX. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LOX alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.