LONP1 Plasmide Double Nickase (m): sc-428748-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LONP1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LONP1 Double Nickase Plasmid (m) e il LONP1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Lonp1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LONP1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-428748-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LONP1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-428748-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Lonp1 codifica LONP1, una proteasi/chaperone alla serina ATP-dipendente localizzata nella matrice mitocondriale, che regola la proteostasi mitocondriale ripiegando oppure degradando proteine danneggiate, mal ripiegate e ossidate. Controllando il turnover dei componenti della catena respiratoria e di fattori regolatori, LONP1 sostiene la fosforilazione ossidativa, il mantenimento del DNA mitocondriale e programmi di adattamento allo stress come la risposta mitocondriale alle proteine non correttamente ripiegate (mitochondrial unfolded protein response). L’alterazione della funzione di LONP1 perturba la dinamica mitocondriale, aumenta le specie reattive dell’ossigeno e compromette l’omeostasi bioenergetica, collegando questa via a fenotipi di disfunzione mitocondriale rilevanti per la neurodegenerazione, lo stress cardiometabolico e il rimodellamento metabolico associato al cancro. Lonp1 nel topo è quindi un nodo chiave per studiare i meccanismi di controllo qualità che integrano proteolisi, rimodellamento ATP-dipendente e segnalazione redox nei mitocondri.
LONP1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Lonp1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Lonp1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Lonp1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Lonp1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.