Plásmido CRISPR de Activación (h) LONP1: sc-411273-ACT

LONP1 codifica la proteasa Lon AAA+ de la matriz mitocondrial, un componente central del control de calidad de las proteínas mitocondriales que acopla el desenrollamiento dependiente de ATP con la proteólisis de proteínas dañadas o mal plegadas. Al regular la degradación de subunidades de la cadena respiratoria y de factores asociados al nucleoide mitocondrial, LONP1 sostiene la fosforilación oxidativa, el mantenimiento del ADN mitocondrial y la respuesta integrada al estrés mitocondrial. La actividad de LONP1 se cruza con vías que gobiernan la proteostasis, la homeostasis de ROS y la apoptosis, vinculando la disfunción mitocondrial con cambios metabólicos y decisiones sobre el destino celular. La expresión o función desregulada de LONP1 se ha asociado con fenotipos de proteopatía mitocondrial y se estudia con frecuencia en el contexto de la neurodegeneración, la remodelación metabólica de células cancerosas y los mecanismos de enfermedades mitocondriales hereditarias.

LONP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LONP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LONP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LONP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LONP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LONP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LONP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LONP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LONP1 en células tumorales con expresión de LONP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.