Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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LOK Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405859
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- LOK El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico LOK, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: LOK Anticuerpo (D-6): sc-398083
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
LOK Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405859 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La quinasa proteica serina/treonina 10 (STK10), también conocida como quinasa orientada a linfocitos (LOK), es una quinasa de la familia STE20 que regula la organización del citoesqueleto y la polaridad celular mediante eventos de fosforilación que influyen en la dinámica de la actina y en la función de las proteínas ERM (ezrina–radixina–moesina). En las células inmunitarias, LOK contribuye a la adhesión y migración de los linfocitos y a la arquitectura de la sinapsis inmunológica, conectando la señalización de los receptores con la remodelación de la actina cortical. La actividad de STK10 se integra con vías dependientes de GTPasas de la familia Rho y con redes de señalización más amplias que coordinan la motilidad y el tráfico tisular. La desregulación de la señalización del citoesqueleto y el control aberrante del movimiento celular mediado por quinasas se han asociado con disfunción inmunitaria y fenotipos relacionados con el cáncer, lo que convierte a STK10 en un objetivo relevante para estudios mecanísticos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO LOK (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen STK10 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del STK10 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de STK10 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LOK.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en STK10 para la investigación de la señalización de LOK, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de STK10 críticos para la función de LOK
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de STK10 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido LOK CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LOK CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus STK10. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LOK (h) y el plásmido HDR LOK (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología STK10 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana STK10 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.