LOC729974 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-418913-KO-2

Descripción general

RFPL4AL1 codifica LOC729974, un presunto miembro de la familia de proteínas tipo ret finger protein, que se predice que participa en redes de interacción proteína–proteína y en la regulación de la homeostasis celular asociada a la ubiquitina. Aunque la anotación funcional sigue siendo limitada, las proteínas tipo RFPL se vinculan comúnmente con el control de la estabilidad proteica, programas transcripcionales y procesos asociados al ciclo celular que determinan estados de proliferación y diferenciación. Por ello, este gen es de interés para desentrañar vías que gobiernan la proteostasis y la señalización reguladora en células humanas, en particular cuando el recambio anómalo de reguladores clave contribuye a fenotipos relevantes para enfermedad. El análisis de pérdida de función puede ayudar a aclarar si LOC729974 influye en respuestas al estrés, regulación asociada a la cromatina u otros programas celulares específicos del contexto.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LOC729974 (h2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RFPL4AL1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RFPL4AL1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RFPL4AL1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LOC729974.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RFPL4AL1 para la investigación de la señalización de LOC729974, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RFPL4AL1 críticos para la función de LOC729974
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RFPL4AL1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LOC729974 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LOC729974 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RFPL4AL1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LOC729974 (h) y el plásmido HDR LOC729974 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RFPL4AL1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RFPL4AL1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.