Plasmide CRISPR/Cas9 KO LOC729974 (h2): sc-418913-KO-2

Présentation

RFPL4AL1 code pour LOC729974, un membre putatif de la famille des protéines de type « ret finger protein », dont on prévoit qu’il participe à des réseaux d’interactions protéine‑protéine et à une régulation de l’homéostasie cellulaire associée à l’ubiquitine. Bien que l’annotation fonctionnelle reste limitée, les protéines de type RFPL sont généralement associées au contrôle de la stabilité des protéines, à des programmes transcriptionnels et à des processus liés au cycle cellulaire qui modulent les états de prolifération et de différenciation. Ce gène présente donc un intérêt pour l’étude des voies qui régissent la protéostasie et la signalisation régulatrice dans les cellules humaines, en particulier lorsque le renouvellement anormal de régulateurs clés contribue à des phénotypes pertinents pour la maladie. Des analyses de perte de fonction peuvent aider à déterminer si LOC729974 influence les réponses au stress, la régulation associée à la chromatine ou d’autres programmes cellulaires dépendant du contexte.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LOC729974 (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RFPL4AL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RFPL4AL1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RFPL4AL1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LOC729974.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RFPL4AL1 pour l'étude de la signalisation de LOC729974, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RFPL4AL1 essentiels à la fonction de LOC729974
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RFPL4AL1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LOC729974 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LOC729974 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RFPL4AL1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LOC729974 plasmide HDR (h) et le LOC729974 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RFPL4AL1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RFPL4AL1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.