LMO2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421447

Descripción general

Lmo2 codifica LIM domain only 2 (LMO2), una proteína adaptadora nuclear que ensambla complejos de transcripción multiproteicos que controlan la especificación de linaje y la diferenciación, en particular en los compartimentos hematopoyético y endotelial. Al servir de puente entre factores de transcripción de unión al ADN y cofactores, LMO2 influye en programas relacionados con el mantenimiento de células madre/progenitoras, la expresión de genes angiogénicos y el desarrollo eritroide. La desregulación de la expresión de LMO2 o una composición alterada de sus complejos se asocia con hematopoyesis anómala y estados transcripcionales oncogénicos, lo que la convierte en un objetivo frecuente en estudios de leucemogénesis y biología vascular. Por ello, los modelos murinos de Lmo2 se utilizan ampliamente para diseccionar la arquitectura de redes transcripcionales, la regulación dependiente de potenciadores (enhancers) y las decisiones de destino durante el desarrollo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LMO2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Lmo2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Lmo2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Lmo2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LMO2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Lmo2 para la investigación de la señalización de LMO2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Lmo2 críticos para la función de LMO2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Lmo2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LMO2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido LMO2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Lmo2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LMO2 (m) y el plásmido HDR LMO2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Lmo2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Lmo2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.