LLH1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422311

Descripción general

Plod1 codifica la lisil hidroxilasa 1 (LLH1), una enzima del retículo endoplásmico que hidroxila residuos específicos de lisina en los procolágenos, lo que permite la glicosilación posterior y estabiliza los entrecruzamientos del colágeno. Mediante la regulación de la maduración del colágeno y la organización de la matriz extracelular, LLH1 influye en la integridad del tejido conectivo, la estructura de la membrana basal y las vías de remodelación tisular. La alteración de la actividad de Plod1 se asocia con una fibrilogénesis del colágeno anómala y con cambios en la mecánica de la matriz, procesos relevantes para la biología de la fibrosis, los fenotipos de fragilidad vascular y cutánea, y los estudios del microambiente tumoral en modelos murinos. En consecuencia, Plod1 se investiga con frecuencia en contextos de señalización impulsada por la MEC, interacciones célula–matriz y mecanotransducción.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LLH1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Plod1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Plod1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Plod1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LLH1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Plod1 para la investigación de la señalización de LLH1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Plod1 críticos para la función de LLH1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Plod1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LLH1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido LLH1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Plod1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LLH1 (m) y el plásmido HDR LLH1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Plod1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Plod1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.