Plasmide CRISPR/Cas9 KO LKLF/KLF2 (h): sc-400918

Présentation

KLF2 (également connu sous le nom de LKLF) code un facteur de transcription à doigts de zinc de type Krüppel, qui contribue au maintien de l’homéostasie des cellules endothéliales et immunitaires en coordonnant des programmes d’expression génique sensibles aux forces de cisaillement. Dans l’endothélium vasculaire, KLF2 intègre la mécanotransduction au contrôle transcriptionnel de voies anti-inflammatoires, antithrombotiques et stabilisatrices de la barrière, notamment via la modulation de la signalisation de l’oxyde nitrique et de l’expression des molécules d’adhésion. Dans les lignées hématopoïétiques, KLF2 influence la quiescence, le trafic et la différenciation des lymphocytes T par la régulation des récepteurs de chimiokines et des réseaux transcriptionnels associés à l’activation. Une activité dérégulée de KLF2 a été associée à l’inflammation vasculaire et à des processus liés à l’athérosclérose, et une expression altérée a été rapportée dans de multiples contextes de cancer et de dérégulation immunitaire, ce qui étaye son utilisation comme nœud fonctionnel dans des études de dissection de voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LKLF/KLF2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KLF2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KLF2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KLF2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LKLF/KLF2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KLF2 pour l'étude de la signalisation de LKLF/KLF2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KLF2 essentiels à la fonction de LKLF/KLF2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KLF2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LKLF/KLF2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LKLF/KLF2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KLF2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LKLF/KLF2 plasmide HDR (h) et le LKLF/KLF2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KLF2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KLF2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.