LKLF/KLF2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400918-ACT

KLF2 (LKLF) codifica um fator de transcrição do tipo Krüppel com dedos de zinco que regula a quiescência endotelial, o tônus vascular e programas gênicos anti-inflamatórios em células humanas. Ele integra sinais hemodinâmicos e de citocinas para modular redes transcricionais ligadas à sinalização por óxido nítrico, à adesão de leucócitos e à coagulação, e interage com vias como MAPK e NF-κB para moldar estados de ativação celular. Em linhagens imunes, KLF2 influencia o tráfego e a diferenciação homeostática por meio do controle de receptores de adesão e da responsividade a quimiocinas. A atividade desregulada de KLF2 tem sido associada a fenótipos de inflamação e remodelamento vascular, e alterações de expressão foram relatadas em múltiplos contextos de câncer, nos quais a reprogramação transcricional afeta a proliferação e programas relacionados à metástase.

LKLF/KLF2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KLF2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LKLF/KLF2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KLF2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KLF2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LKLF/KLF2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KLF2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LKLF/KLF2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LKLF/KLF2 em células tumorais com expressão de KLF2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.