Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
LKB1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400313
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- LKB1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico LKB1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: LKB1 Anticuerpo (Ley 37D/G6): sc-32245
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
LKB1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400313 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
STK11 codifica la quinasa de serina/treonina LKB1, un regulador maestro de la homeostasis energética y de la polaridad celular a través de la fosforilación de AMPK y de quinasas relacionadas de la familia de AMPK. Al integrar señales de nutrientes y de estrés, LKB1 influye en la señalización de mTOR, la autofagia, el metabolismo mitocondrial y el control del ciclo celular, y contribuye a la organización epitelial mediante complejos de polaridad. La alteración de la señalización dependiente de LKB1 se asocia con cambios en la adaptación metabólica, defectos de polaridad y respuestas al estrés genómico. STK11 se estudia con frecuencia en biología del cáncer y en contextos de predisposición hereditaria a tumores, donde la pérdida de la función de LKB1 reconfigura el control del crecimiento y las vías metabólicas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO LKB1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen STK11 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del STK11 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de STK11 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LKB1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en STK11 para la investigación de la señalización de LKB1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de STK11 críticos para la función de LKB1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de STK11 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido LKB1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LKB1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus STK11. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LKB1 (h) y el plásmido HDR LKB1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología STK11 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana STK11 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.