Plásmido CRISPR de Activación (m) LITAF: sc-425275-ACT

LITAF (factor de TNF inducido por lipopolisacáridos) en ratón es un regulador transcripcional y una proteína adaptadora implicada en la señalización de la inmunidad innata y en la expresión de genes inflamatorios. Participa en vías situadas aguas abajo de la estimulación de los receptores tipo Toll, influyendo en los programas de TNF y otras citocinas, e interactuando con el tráfico endosomal y con procesos dependientes de ubiquitina que modulan el recambio de receptores. La actividad de LITAF se ha relacionado con la regulación de respuestas asociadas a NF-κB y con la remodelación transcripcional inducida por estrés en macrófagos y otros tipos celulares relevantes para el sistema inmunitario. La desregulación de la señalización de LITAF se ha estudiado en contextos de inflamación crónica y biología de infecciones, y sus funciones celulares también son pertinentes para modelos de neuroinflamación y mecanismos de neuropatía periférica.

LITAF El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Litaf sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LITAF El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Litaf en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Litaf, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LITAF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Litaf y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LITAF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LITAF en células tumorales con expresión de Litaf silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.