Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
LIS1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422102
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- LIS1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico LIS1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: LIS1 Anticuerpo (H-7): sc-374586
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
LIS1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422102 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Pafah1b1 codifica LIS1, una proteína reguladora que se une a la dineína y gobierna el transporte dependiente de microtúbulos, el posicionamiento del centrosoma y la organización del huso mitótico. En células de ratón, LIS1 favorece la proliferación de progenitores neuronales y la migración neuronal al ajustar la procesividad del complejo dineína–dinactina citoplasmático y acoplar el movimiento de la carga a la red de microtúbulos. Estas funciones se integran con vías de remodelación del citoesqueleto y de progresión del ciclo celular que modelan la arquitectura tisular durante el desarrollo. La alteración de procesos asociados a LIS1 se vincula con fenotipos del neurodesarrollo caracterizados por una estratificación cortical anómala y un posicionamiento neuronal deficiente.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO LIS1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pafah1b1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pafah1b1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pafah1b1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LIS1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pafah1b1 para la investigación de la señalización de LIS1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Pafah1b1 críticos para la función de LIS1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pafah1b1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido LIS1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido LIS1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pafah1b1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LIS1 (m) y el plásmido HDR LIS1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pafah1b1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pafah1b1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.