LIN-9 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-418584-ACT

Humanes LIN9 kodiert LIN-9, eine zentrale Komponente des MuvB/DREAM-Regulationsnetzwerks, das die Expression von Zellzyklusgenen koordiniert, indem es zwischen transkriptioneller Repression in der Quieszenz und Aktivierung während der S‑Phase und Mitose umschaltet. LIN-9 unterstützt den Zusammenbau von Komplexen mit E2F- sowie B‑Myb/FOXM1-assoziierten Faktoren, um Promotoren von Genen zu regulieren, die DNA-Replikation, die Dynamik der mitotischen Spindel und die Zytokinese steuern. Über diese Interaktionen trägt LIN-9 zur Genomstabilität und zu einem geordneten Zellzyklusverlauf bei und ist damit relevant für Studien zur proliferativen Dysregulation und chromosomalen Instabilität in der Krebsbiologie. LIN9-abhängige Transkriptionsprogramme werden außerdem genutzt, um Checkpoints und Stressantworten zu untersuchen, die die Proliferation in unterschiedlichen Zelltypen beeinflussen.

LIN-9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LIN9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LIN-9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LIN9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LIN9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LIN-9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LIN9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LIN-9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LIN-9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LIN9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.