Plasmide Double Nickase (h) LIN-41: sc-405036-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) LIN-41 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LIN-41 Double Nickase (h) et le plasmide LIN-41 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TRIM71. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: LIN-41 Antibody (E-1): sc-393352
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) LIN-41 | sc-405036-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) LIN-41 | sc-405036-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRIM71 code pour la ligase E3 d’ubiquitine LIN-41, une protéine conservée se liant à l’ARN et régulant le contrôle post-transcriptionnel de l’expression génique en coordonnant la stabilité des ARNm et leur traduction via ses domaines TRIM et NHL. LIN-41 intervient dans le calendrier du développement et les programmes des cellules souches en modulant la différenciation, la progression du cycle cellulaire et la protéostasie, et elle s’articule avec la régulation médiée par les microARN, notamment la voie let-7. Dans les cellules humaines, l’activité de TRIM71 est associée au maintien de la pluripotence et aux choix de lignée neurale, et sa dérégulation est impliquée dans des phénotypes de croissance aberrante et de développement. Ces propriétés font de TRIM71 une cible pertinente pour disséquer les régulons d’ARN, la signalisation dépendante de l’ubiquitine et les mécanismes d’engagement de lignée.
LIN-41 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TRIM71 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TRIM71. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TRIM71. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TRIM71.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.