Partículas Lentivirales de Activación (h) LIMP II: sc-402532-LAC

SCARB2 codifica la proteína integral de membrana lisosomal 2 (LIMP II), una glicoproteína de membrana multipaso enriquecida en endosomas tardíos y lisosomas que favorece el tráfico endolisosomal y la homeostasis lisosomal. LIMP II actúa como un receptor clave para la entrega de la β‑glucocerebrosidasa (GCase) a los lisosomas, vinculando la función de SCARB2 con el metabolismo de esfingolípidos y la proteostasis dentro de la vía autofagia–lisosoma. A través de sus funciones en la organización de membranas y el transporte de carga, SCARB2 influye en procesos como la endocitosis, la clasificación de enzimas lisosomales y la degradación de macromoléculas. La actividad alterada de SCARB2/LIMP II se ha asociado con fenotipos de almacenamiento lisosomal y estrés celular relacionado con la neurodegeneración, lo que lo convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de la disfunción lisosomal y el catabolismo lipídico.

Las partículas de activación lentiviral LIMP II (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SCARB2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral LIMP II (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SCARB2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de LIMP II. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SCARB2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.