Plásmido CRISPR de Activación (h) Limkain b1: sc-411308-ACT

KIAA0430 codifica Limkain b1, una proteína humana implicada en la organización del citoesqueleto y en procesos asociados a la actina que dan forma a la morfología celular, la adhesión y la motilidad. Los estudios de las proteínas de la familia Limkain sugieren vínculos con vías de señalización que acoplan la dinámica de membrana con la remodelación de la actina, favoreciendo cambios coordinados en la arquitectura celular. La regulación alterada de las redes de actina-citoesqueleto se asocia con frecuencia a fenotipos de proliferación, migración e invasión desregulados en cáncer, y a una conectividad neuronal deteriorada en contextos del neurodesarrollo. Caracterizar la expresión y la función de Limkain b1 puede ayudar a aclarar cómo el control del citoesqueleto se integra con programas transcripcionales y de señalización más amplios relevantes para transiciones de estado celular asociadas a enfermedad.

Limkain b1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KIAA0430 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Limkain b1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KIAA0430 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KIAA0430, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Limkain b1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KIAA0430 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Limkain b1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Limkain b1 en células tumorales con expresión de KIAA0430 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.