Plasmide CRISPR d'Activation (h) LHX9: sc-403360-ACT

LHX9 (LIM homeobox 9) code un facteur de transcription à domaine LIM qui régule les décisions de destinée cellulaire au cours du développement embryonnaire en contrôlant des programmes d’expression génique spécifiques de lignée. En biologie humaine, l’activité de LHX9 est associée aux processus d’organisation (patterning) et de différenciation dans le système nerveux en développement ainsi que dans les tissus gonadiques, où un contrôle transcriptionnel temporel précis est nécessaire. En tant que régulateur se liant à l’ADN, LHX9 interagit avec la chromatine et des réseaux transcriptionnels qui façonnent les voies du développement, et des altérations de son expression ont été étudiées dans des contextes de différenciation dérégulée et d’états transcriptionnels oncogéniques. Ces propriétés font de LHX9 une cible utile pour étudier les circuits de régulation génique, les facteurs de transcription du développement et la modulation des phénotypes induite par des variations de la transcription endogène.

LHX9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LHX9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LHX9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LHX9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LHX9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LHX9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LHX9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LHX9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LHX9 dans les cellules tumorales présentant une expression de LHX9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.