LHX9 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403360-ACT

LHX9 (LIM Homeobox 9) kodiert einen Transkriptionsfaktor mit LIM-Domäne, der während der embryonalen Entwicklung Zellschicksalsentscheidungen reguliert, indem er linienspezifische Genexpressionsprogramme steuert. In der menschlichen Biologie wird die Aktivität von LHX9 mit Musterbildungs- und Differenzierungsprozessen im sich entwickelnden Nervensystem und in gonadalen Geweben in Verbindung gebracht, wo eine präzise zeitliche Kontrolle der Transkription erforderlich ist. Als DNA-bindender Regulator interagiert LHX9 mit Chromatin- und Transkriptionsnetzwerken, die Entwicklungsprogramme formen, und eine veränderte Expression wurde im Kontext fehlregulierter Differenzierung und onkogener Transkriptionszustände untersucht. Diese Eigenschaften machen LHX9 zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung genregulatorischer Schaltkreise, entwicklungsbiologischer Transkriptionsfaktoren und phänotypischer Modulation, die durch Veränderungen der endogenen Transkription angetrieben wird.

LHX9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LHX9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LHX9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LHX9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LHX9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LHX9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LHX9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LHX9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LHX9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LHX9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.