Plásmido CRISPR de Activación (h) LHX1: sc-403100-ACT

LHX1 (LIM homeobox 1) codifica un factor de transcripción con dominio LIM que coordina la especificación de linajes y el patrón de los tejidos durante la embriogénesis, incluidas funciones en el desarrollo neural, renal y del tracto reproductor. Al unirse al ADN mediante su homeobox y ensamblar complejos transcripcionales a través de interacciones LIM, LHX1 regula programas que controlan decisiones de destino celular, morfogénesis y diferenciación. La expresión desregulada de LHX1 o alteraciones en el cableado del desarrollo se han implicado en anomalías congénitas y se han observado en estados transcripcionales asociados al cáncer en los que se reactivan reguladores del desarrollo. Como nodo en redes reguladoras génicas del desarrollo, LHX1 se estudia con frecuencia en diferenciación de células madre, modelos de organogénesis y control transcripcional de la identidad tisular.

LHX1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LHX1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LHX1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LHX1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LHX1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LHX1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LHX1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LHX1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LHX1 en células tumorales con expresión de LHX1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.