Plasmide CRISPR d'Activation (h) LGR6: sc-401443-ACT

Le gène humain **LGR6** code un récepteur couplé aux protéines G contenant des répétitions riches en leucine, qui agit comme récepteur de haute affinité des R-spondines et potentialise la signalisation canonique **Wnt/β-caténine**. En renforçant les programmes transcriptionnels induits par Wnt, LGR6 contribue à la régulation du maintien des cellules souches/progénitrices épithéliales, de l’homéostasie tissulaire et des dynamiques de différenciation. L’activité de LGR6 s’articule avec des voies impliquées dans le contrôle du cycle cellulaire, la migration et les réponses régénératives, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier les interactions entre voies de signalisation au cours du développement et du remodelage. Une dérégulation de l’axe **LGR6–R-spondine–Wnt** a été associée à l’activation de voies oncogéniques et à des états de type « stem-like » altérés, ce qui soutient l’étude de LGR6 en biologie du cancer et des phénotypes de signalisation associés.

LGR6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LGR6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LGR6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LGR6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LGR6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LGR6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LGR6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LGR6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LGR6 dans les cellules tumorales présentant une expression de LGR6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.