Plásmido CRISPR de Activación (m) LEREPO4: sc-427290-ACT

Zc3h15 de ratón codifica la proteína LEREPO4, un factor de unión a ARN tipo dedo de zinc CCCH implicado en la regulación génica postranscripcional, incluida la estabilidad del ARNm y el control de la traducción. Al modular el procesamiento y el recambio del ARN, Zc3h15 puede influir en las señales aguas abajo de los programas de inmunidad innata y de respuesta al estrés que dependen de una remodelación rápida de los transcritos. La actividad alterada de proteínas de unión a ARN con dedos de zinc CCCH se asocia con frecuencia a una expresión desregulada de citocinas, a la adaptación al estrés celular y a una proliferación anómala, lo que convierte a Zc3h15 en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación centrada en el ARN. En modelos de investigación biomédica, la perturbación de Zc3h15 permite el análisis de vías en inflamación, regulación hematopoyética y otros contextos en los que las decisiones sobre el destino del ARN determinan el fenotipo.

LEREPO4 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Zc3h15 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LEREPO4 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Zc3h15 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Zc3h15, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LEREPO4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Zc3h15 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LEREPO4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LEREPO4 en células tumorales con expresión de Zc3h15 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.