Plasmide CRISPR/Cas9 KO LEPROT (h): sc-406321

Présentation

LEPROT (leptin receptor overlapping transcript), également connu sous le nom d’endospanine‑1, est une protéine membranaire des endosomes qui module le trafic et l’abondance à la surface cellulaire des récepteurs de cytokines, avec des effets marqués sur LEPR et les complexes de signalisation apparentés. En régulant l’internalisation et le recyclage des récepteurs, LEPROT peut influencer l’activité des voies de signalisation JAK/STAT, ainsi que, plus largement, le contrôle de la transduction du signal au voisinage de la membrane. Une expression altérée de LEPROT a été associée à des phénotypes métaboliques via ses effets sur la réponse à la leptine et l’homéostasie énergétique. Son rôle dans le tri des récepteurs le rend également pertinent pour l’étude des signalisations associées à l’inflammation et du renouvellement aberrant des récepteurs dans des contextes pathologiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LEPROT (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LEPROT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LEPROT, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LEPROT à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LEPROT.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LEPROT pour l'étude de la signalisation de LEPROT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LEPROT essentiels à la fonction de LEPROT
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LEPROT pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LEPROT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LEPROT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LEPROT. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LEPROT plasmide HDR (h) et le LEPROT (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LEPROT pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LEPROT définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.