LENG4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-408536

Descripción general

MBOAT7 codifica una O-aciltransferasa unida a membrana y localizada en el retículo endoplásmico que remodela el fosfatidilinositol al incorporar araquidonoil‑CoA, configurando así la composición de los fosfoinosítidos celulares y la señalización aguas abajo. A través de sus efectos sobre la homeostasis lipídica de membrana, MBOAT7 influye en nodos de señalización derivados de PI que regulan el tráfico vesicular, la dinámica del citoesqueleto y las respuestas inflamatorias. La actividad o expresión alterada de MBOAT7 se ha vinculado a fenotipos metabólicos y hepáticos, incluida la susceptibilidad a la desregulación lipídica y al daño hepático, lo que la hace relevante para estudios de inmunometabolismo y señalización de estrés. LENG4 (miembro 4 del clúster de receptores de leucocitos) es una proteína humana con funciones emergentes en contextos asociados al sistema inmunitario, y permite analizar a nivel de vías la interacción entre la señalización lipídica y la respuesta inmune en modelos celulares pertinentes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LENG4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MBOAT7 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MBOAT7 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MBOAT7 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LENG4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MBOAT7 para la investigación de la señalización de LENG4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MBOAT7 críticos para la función de LENG4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MBOAT7 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LENG4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LENG4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MBOAT7. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LENG4 (h) y el plásmido HDR LENG4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MBOAT7 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MBOAT7 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.