LDH-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (r): sc-437361

概要

乳酸脱水素酵素A（LDH-A）は、NADH/NAD⁺のサイクリングを伴いながら、ピルビン酸と乳酸の相互変換を触媒する。これは嫌気的解糖を支え、レドックス恒常性を維持するうえで重要な反応である。ラット細胞では、LDH-Aは低酸素や高いエネルギー需要下で解糖系フラックスの維持に寄与し、乳酸産生、細胞質pHバランス、TCA回路との代謝クロストークに影響を与える。LDH-A活性は、増殖やストレス適応に伴う代謝再プログラム化と密接に結びついており、HIF-1により制御される応答やNAD⁺利用可能性の変化などが含まれる。LDH-A依存的な乳酸代謝の破綻は、虚血性障害、炎症、腫瘍様の代謝表現型といった病的状況との関連が示されており、代謝シグナル伝達の機序研究に有用な標的となる。

LDH-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r）は、rat細胞株における遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LDH-Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LDH-Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LDH-Aの機能に不可欠なエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LDH-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r）およびLDH-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r2）によってコードされるgRNAは、遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LDH-A HDRプラスミド（r）および LDH-A HDRプラスミド（r2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定の標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。