Plasmide Double Nickase (h) Lck: sc-400434-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Lck correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Lck Double Nickase (h) et le plasmide Lck Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant LCK. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Lck Antibody (3A5): sc-433
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Lck | sc-400434-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Lck | sc-400434-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LCK code Lck, une tyrosine kinase de la famille Src qui initie la signalisation en aval du récepteur des lymphocytes T (TCR) en phosphorylant les motifs ITAM et en coordonnant le recrutement de ZAP70 et de complexes adaptateurs. Par ces événements proximaux, Lck régule l’activation des voies MAPK/ERK, PI3K–AKT et NF-κB/NFAT, qui contrôlent le développement et l’activation des lymphocytes T, la production de cytokines et la formation de la synapse immunologique. Une activité ou une expression dérégulée de LCK est associée à des états de signalisation lymphocytaire altérés et a été impliquée dans la dysrégulation immunitaire et la biologie des hémopathies malignes. En tant que nœud des réseaux de phosphorylation proximaux aux récepteurs, Lck est largement étudiée en phosphoprotéomique, en signalisation des kinases et en génomique fonctionnelle des cellules immunitaires humaines.
Lck Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LCK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LCK. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LCK. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LCK.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.