Lck CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421397

Übersicht

Lck (lymphozytenspezifische Protein-Tyrosin-Kinase) ist eine Kinase der Src-Familie, die die Signalübertragung über den T‑Zell‑Rezeptor (TCR) initiiert, indem sie ITAM-Motive von CD3 phosphoryliert und dadurch die Rekrutierung und Aktivierung von ZAP70 fördert, was zur nachgeschalteten Assemblierung des LAT/SLP‑76-Signalosoms führt. In Immunzellen der Maus reguliert Lck frühe („proximale“) Signalereignisse, die die Antigenerkennung mit Kalziumflüssen, MAPK-Aktivierung und Transkriptionsprogrammen koppeln, die von NFAT, NF‑κB und AP‑1 gesteuert werden, und prägt damit die Thymozytenentwicklung sowie die Aktivierung peripherer T‑Zellen. Die Lck-Aktivität ist in die Korezeptor-Signalgebung (CD4/CD8) integriert und wird durch einen phosphorylierungsabhängigen Wechsel zwischen aktiven und inaktiven Konformationen moduliert, wodurch Lck eine zentrale Rolle für die Signalierungsschwellen in Lymphozyten einnimmt. Fehlregulierte Lck-abhängige Signalwege werden häufig als Modelle für veränderte Immunaktivierung, Lymphoproliferation und aberrante Tyrosinkinase-Signalgebung im hämatopoetischen Kontext genutzt.

Das Lck CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Lck-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Lck-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Lck nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Lck-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Lck-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Lck-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Lck-Exone abzielen, die für die Lck-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Lck-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Lck CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Lck CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Lck-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Lck HDR-Plasmid (m) und Lck HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Lck-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Lck-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.