Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
LC3B Double Nickase Plasmid (h): sc-417828-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LC3B Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LC3B Double-Nickase-Plasmid (h) und LC3B Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MAP1LC3B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LC3B Double Nickase Plasmid (h) | sc-417828-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LC3B Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417828-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MAP1LC3B kodiert die mikrotubuli-assoziierten Proteine 1A/1B, leichte Kette 3B (LC3B), einen zentralen Bestandteil der Autophagie-Maschinerie, der eine ATG7-/ATG3-abhängige Lipidierung durchläuft und dabei auf Autophagosomenmembranen zu LC3-II wird. LC3B unterstützt die Elongation des Phagophors und die Erfassung von Fracht über LC3-interagierende Regionen (LIR)-Motive in Rezeptoren der selektiven Autophagie wie p62/SQSTM1, indem es ubiquitinierte Substrate mit der Autophagosomenbildung verknüpft. Über diese Interaktionen integriert LC3B Nährstoffsensorik- und Stressantwort-Signalwege, einschließlich mTOR- und AMPK-Signalisierung, um Proteostase und die Qualitätskontrolle von Organellen zu regulieren. Eine fehlregulierte, LC3B-assoziierte Autophagie wurde mit Neurodegeneration, Infektionsbiologie, metabolischen Funktionsstörungen und krebsassoziierter Stressanpassung in Verbindung gebracht, weshalb LC3B in der Autophagieforschung häufig als Marker und mechanistischer Knotenpunkt genutzt wird.
LC3B Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MAP1LC3B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MAP1LC3B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MAP1LC3B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MAP1LC3B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.