Plasmide CRISPR/Cas9 KO LBX1 (h): sc-406846

Présentation

LBX1 (ladybird homeobox 1) code un facteur de transcription à homéoboîte qui régule la mise en place des patrons embryonnaires et la spécification des lignages, avec des rôles majeurs dans la différenciation des interneurones de la moelle épinière et la migration des précurseurs du muscle squelettique. Grâce à une liaison à l’ADN spécifique de séquence, LBX1 contribue à coordonner des programmes transcriptionnels qui façonnent le développement dorsoventral du tube neural et les voies myogéniques pendant la somitogenèse. Des variations génétiques et une régulation altérée de LBX1 ont été associées à des phénotypes du développement, notamment une susceptibilité à la scoliose idiopathique de l’adolescent, soulignant sa pertinence pour la recherche musculosquelettique et neurodéveloppementale. Dans les modèles cellulaires, LBX1 est couramment étudié pour son impact sur l’état de différenciation, le maintien de l’identité cellulaire et les réseaux transcriptionnels en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LBX1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LBX1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LBX1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LBX1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LBX1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LBX1 pour l'étude de la signalisation de LBX1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LBX1 essentiels à la fonction de LBX1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LBX1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LBX1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LBX1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LBX1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LBX1 plasmide HDR (h) et le LBX1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LBX1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LBX1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.