Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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LAT1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401609-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LAT1 Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- LAT1 CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal LAT1 CRISPR Activation Plasmid (h) e dal LAT1 CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di SLC7A5. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LAT1 Antibody (D-10): sc-374232
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LAT1 Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-401609-ACT | 20 µg | $397.00 |
SLC7A5 codifica il trasportatore umano di amminoacidi neutri di tipo L 1 (LAT1), un trasportatore ad alta affinità che, in associazione con la catena pesante SLC3A2 (CD98), media l’assorbimento di amminoacidi neutri di grandi dimensioni come la leucina. Controllando la disponibilità intracellulare di amminoacidi, LAT1 sostiene il nutrient sensing e il metabolismo anabolico, influenzando reti di segnalazione quali mTORC1 e le vie della risposta integrata allo stress, che collegano il trasporto alla crescita e alla proteostasi. L’attività di LAT1 è spesso studiata in contesti di riprogrammazione metabolica, biologia del trasporto attraverso barriere e fenotipi proliferativi in cui il flusso di amminoacidi limita la capacità biosintetica. Un’espressione deregolata di SLC7A5 è stata associata a una dipendenza alterata dai nutrienti e a vulnerabilità legate ai trasportatori in molteplici modelli di malattia, rendendolo un punto di partenza ampiamente utilizzato per interrogare la segnalazione guidata dagli amminoacidi.
LAT1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC7A5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
LAT1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC7A5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC7A5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LAT1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC7A5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LAT1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LAT1 nelle cellule tumorali con espressione di SLC7A5 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.