LAR Lentiviral Activation Particles (h): sc-402674-LAC

Protein-Tyrosin-Phosphatase, Rezeptortyp F (PTPRF), auch als LAR bekannt, ist eine rezeptorähnliche Protein-Tyrosin-Phosphatase, die phosphorylierungsabhängige Signalübertragung an der Plasmamembran sowie an Zell-Zell- bzw. Zell-Matrix-Kontaktstellen moduliert. LAR beeinflusst die Dynamik fokaler Adhäsionen, das Neuritenauswachsen und die synaptische Organisation, indem es Signalwege downstream von Rezeptor-Tyrosinkinasen und integrinassoziierter Signalgebung reguliert und so Zytoskelett-Remodelling und Zellmigration beeinflusst. Über seine extrazellulären, adhäsionsähnlichen Domänen und seine intrazelluläre Phosphataseaktivität kann PTPRF die Outputs der MAPK/ERK- und PI3K/AKT-Signalwege durch Dephosphorylierung ausgewählter Substrate feinabstimmen. Eine dysregulierte PTPRF/LAR-Signalgebung wurde mit veränderter metabolischer Signalübertragung sowie neuroentwicklungsbezogenen oder neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht, was PTPRF für mechanistische Studien zur Insulinsignalgebung, neuronalen Konnektivität und invasionsbezogenen Zellprogrammen relevant macht.

LAR Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PTPRF-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

LAR Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PTPRF-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen LAR-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PTPRF-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.